首先要设计上样的顺序，一般是让与抗体有反应的样品和没有反应的样品间隔开，这样条带之间反差比较明显。比如你的检测样能够与抗体反应，上样就是maker—阳性对照—阴性对照—检测样(N个)，如果检测样比较多，可以在检测样后再加上一个阴性对照和阳性对照。

上样量一般5-20微升(样品与上样buffer混合后)，可以先做个普通的染色，看看条带有没有溢出，如果溢出了就上少点，太浅就上多点。

都调整好了再继续做转印。